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如何区分选用细胞株还是自己原代培养

提示：

如何区分选用细胞株还是自己原代培养

根据你的实验要求了，总的来说，原代细胞培养专家齐氏生物认为 原代细胞的实验数据比细胞株更加精准。
举个例子：做一个药物对肝纤维化作用机制的研究，需要肝星状细胞。
只有原代肝星状细胞在体外才是最接近体内细胞的，才能能更好的说明你这药物的作用机制，肝星状细胞系是经过用生化改造的细胞，已经不是正常的细胞了， 已经不能准确模拟该药物上对肝纤维化的作用机制。
从科研的角度，原代细胞的实验结果更加理想！

关于细胞株和细胞系以及原代细胞的区别

提示：

关于细胞株和细胞系以及原代细胞的区别

1、获取方法不同，原代细胞是指从机体取出后立即培养的细胞；细胞株是通过选择法或克隆形成法从原代培养物或细胞系中获得具有特殊性质或标志物的培养物；细胞系是原代细胞培养物经首次传代成功后所繁殖的细胞群体。 2、原代培养的细胞一般传至10代左右就不容易传下去了，细胞的生长就会出现停滞，大部分细胞衰老死亡。但是有极少数的细胞能够度过“危机”而继续传下去，这些存活的细胞一般能够传到40--50代，这种传代细胞叫做细胞株； 细胞株的遗传物质没有发生改变。当细胞传至50代以后又会出现“危机”，不能再传下去。但是有部分细胞的遗传物质发生了改变，并且带有癌变的特点，有可能在培养条件下无限制地传代下去，这种传代细胞称为细胞系。 3、原代培养物经首次传代成功即称为细胞系，因此细胞系可泛指一般可能传代的细胞。其中能够连续传代的细胞叫做连续细胞系或无限细胞系，不能连续培养的称为有限细胞系； 大多数二倍体细胞为有限细胞系。通过选择法或克隆形成法从原代培养物或细胞系中获得具有特殊性质或标志物的培养物称为细胞株，也就是说，细胞株是用单细胞分离培养或通过筛选的方法，由单细胞增殖形成的细胞群。细胞株的特殊性质或标志必须在整个培养期间始终存在。 参考资料来源：百度百科-原代细胞 参考资料来源：百度百科-细胞株 参考资料来源：百度百科-细胞系

细胞培养知识点

提示：

细胞培养知识点

即4',6-二脒基-2-苯基吲哚(4',6-diamidino-2-phenylindole)，是一种能够与DNA强力结合的荧光染料，常用于荧光显微镜观测. 因为DAPI可以透过完整的细胞膜，它可以用于活细胞和固定细胞的染色。（流式检测荧光病毒感染细胞时加DAPI去死活） 有些抗生素会在一周内降解，培养基最好现用现配。 丙酮酸钠可以作为细胞培养中的替代碳源，尽管细胞更倾向于以葡萄糖作为碳源，但是如果没有葡萄糖的话，细胞也可以代谢丙酮酸钠。 几乎所有的细胞对谷氨酰胺都有较高的要求。谷氨酰胺脱掉氨基后，可作为培养细胞的能量来源，参与蛋白质的合成和能量代谢。在缺少谷氨酰胺时，细胞生长不良而死亡。所以，各种培养液中都含有较大量的谷氨酰胺。谷氨酰胺在溶液中很不稳定，应置-20℃冰冻保存，用前加入培养基中。加有谷氨酰胺的液体培养基4度冰箱储存两周以上时，应重新加入原来量的谷氨酰胺。 GlutaMAX-Ⅰ是一个L-谷氨酰胺的衍生物，其不稳定的a-氨基用L-丙氨酸来保护。一种肽酶逐渐裂解二肽，释放L-谷氨酰胺供利用。 GlutaMAX-Ⅰ二肽非常稳定，即使在121℃灭菌20min， GlutaMAX-Ⅰ二肽溶液有最小的降解；而在相同条件下，L-谷氨酰胺几乎完全降解。 L-谷氨酰胺在细胞培养时是重要的，但其在溶液中不稳定，经过一段时间后会降解，确切的降解率一直没有最终确定。L-谷氨酰胺的降解导致氨的形成，而氨对于一些细胞具有毒性。因此GlutaMAX-Ⅰ是细胞培养中谷氨酰胺的替代品 与CO2一起形成缓冲系统，保持培养基PH值稳定。 在细胞表面,NRDc能够结合HB-EGF并能促进其诱导的细胞迁移。 NRDc基因敲除的小鼠,大部分在出生后48小时内死亡,神经系统发育滞后。 我们研究发现,NRDc是第一个特异结合组蛋白H3K4me2的蛋白,并且具有调控基因转录的功能。 中文名分散酶II，一种非特异性金属蛋白酶，细胞生物学中常被用来从各种不同组织或器官中消化细胞外基质，释放并制备原代单细胞；或用于细胞培养中的细胞收获或接种转移；也被用于防止悬浮细胞培养时的细胞意外结团。，如原代细胞的分离，细胞传代等。另外，Dispase II还可用于消除悬浮细胞培养过程中发生的细胞聚集。与其他细胞生物学常用蛋白酶（如胰蛋白酶、胶原酶、链霉蛋白酶等）相比，该酶具有以下优势：1）一种快速有效且温和的细胞消化酶，对细胞损伤小，且能维持细胞膜完整性；2）来源于细菌，无支原体或其他动物病毒污染；3）稳定性强，不受温度、pH及血清组分的影响；4）可用于多种类型组织和细胞的分离等。 本品非无菌Dispase II，来源于Bacillus polymyxa，使用时需对其除菌处理，用于细胞培养时常用工作浓度为0.6-2.4 U/mL。 是包含蛋白水解酶和胶原酶活性的一种细胞消化液，是胰酶/EDTA消化液的完美替换产品，用于从常规组织培养器皿和粘附培养器皿中消化细胞，消化为单个细胞。与传统的胰酶消化液相比，本品具有以下优势： 1）适用于绝大多数原代细胞和哺乳动物细胞系的消化，以及昆虫细胞； 2）温和有效的消化干细胞（hESCs和mESCs），冻存后细胞具更高复苏率； 3）几分钟内实现粘附细胞的分离，不需清洗或中和反应，节省细胞传代时间； 4）对细胞消化较为温和，能增加细胞产量和存活率；增强细胞贴壁效率；改善细胞形态和细胞生长特性等。 注意事项：Accutase™融化后4℃保存，至少2个月稳定。不可室温保存。也可分装成单次用量，放到-80 ℃冻存，有效期2年。 cGMP mTeSR™1是使用最为广泛的，用于培养人胚胎干细胞（ES 细胞）和诱导多能干细胞（hiPS 细胞）的无饲养层培养基。从iPS的生成、培养到诱导分化，使用mTeSR™1培养细胞均建立了成熟的实验流程；该培养基已在50多个国家成功用于维持上千种ES细胞系和iPS细胞系，应用此培养基的研究成果发表于顶级的多能干细胞杂志，并为干细胞研究人员提供了强大的支持。 mTeSR™1是一款高度专业化、不含血清的完全培养基。mTeSR™1培养基选用的原材料经过严格的预筛选，确保了批次间的一致性，同时为ES 和iPS细胞的无饲养层培养提供稳健的实验环境，这为研究人员提供具有高度一致性的、表型均一、未经分化的高质量ES/iPS细胞培养物提供了保障。 mTeSR1在符合cGMP质量管理体系下生产，确保最高的质量和一致性以及可重复性。 建立体外AGM-S3基质细胞共培养体系,以揭示AGM-S3细胞对终末分化中性. 是指在琼脂平板上经过一定温度和时间培养后形成的每一个菌落，是计算细菌或霉菌数量的单位。这个单位比“菌落数”更准确地反映问题的实质。理论上，一个活细菌可以在条件合适的固体表面上形成一个菌落，但是吸附于微小颗粒上的两个以上菌体或粘连在一起的菌团可能共同形成一个菌落，而且不同环境因素作用下，细菌的生活能力各不相同，会影响其在该条件下形成菌落的能力，致使形成的菌落数远低于实际的活菌数。因此可用菌落形成单位代替以往常用的“菌落数”作为平板计数的数量单位。 消化试剂。一种无酶试剂，适用于将人胚胎干（ES）细胞或人诱导多能干（iPS）细胞集落解离为细胞聚集体，且无需对已发生分化的集落进行手工挑选。 Matrigel是一种细胞外基质的混合物，其中包含laminin和多种生长因子，用于细胞培养。 基底胶是从富含胞外基质蛋白的EHS小鼠肿瘤中提取出基底膜基质，其主要成分有层粘连蛋白、Ⅳ型胶原、巢蛋白、肝素糖蛋白，还包含生长因子和基质金属蛋白酶等。在室温条件下，基底胶聚合形成具有生物学活性的三维基质，模拟体内细胞基底膜的结构、组成、物理特性和功能，有利于体外细胞的培养和分化，可用于对细胞形态、生化功能、迁移、侵染和基因表达等的研究。 用途：培养细胞时可无需稀释直接包被，包被厚度可为0.5 mm(薄层)或1.0 mm(厚层)。Matrigel也可以在无血清培养基中稀释后用于包被培养器皿表面，根据细胞类型和应用目的确定相应Matrigel浓度。 温和细胞解离试剂（GCDR）是一种无酶试剂，适用于将人胚胎干（ES）细胞或人诱导多能干（iPS）细胞解离为细胞聚集体以进行常规传代或单细胞悬浮液。它也适用于分离肠隐窝以建立肠道类器官，以及用于在传代类器官培养物时分解康宁®基质凝胶®圆顶。GCDR不含酶或其他蛋白质。 GCDR现在也在经过认证的质量管理体系下按照相关的cGMP制造，以确保可重复结果的最高质量和一致性。 基于最原始的配方，是我们成分明确、一致性高的无滋养层培养基，用于培养诱导多能干细胞（iPSC）。也可用于ESC培养。（* DOI: 10.1111/cpr.13002 ） 人多能干细胞基础培养基，是完全确定的、不含血清和动物源成份的培养基，用于人ES和iPS细胞的分化。它是基于AndrewElefanty博士发表的APEL配方（缺乏不确定的成份，如不含蛋白的杂交瘤培养基） 该培养基可用于贴壁或EB操作流程。 可与多种不同的诱导因子或细胞因子一起使用，支持外胚层，中胚层和内胚层谱系的分化。 它们基本参与了90%以上种类细胞的培养过程。 作为带头大哥，能力非常全面，号称是应用最广泛的细胞培养液。 作为随时紧跟老大MEM的二弟，青出于蓝而胜于蓝，浓度要高出2~4倍，可分为高糖型（含葡萄糖4500mg/L）和低糖型（含葡萄糖1000mg/L）。 老三中规中矩，营养成分比较简单，比DMEM少一点糖和谷光甘肽，常用于淋巴细胞的培养。 起初是作为一种无血清配方设计的，常补加血清用于支持各种正常的和转化细胞的增殖。F12常和DMEM以I:I结合，称为 DMEM/F12培养基 ，作为开发无血清配方的基础，以利用F12含有较丰富的成分和DMEM含有较高浓度的营养成分的优点。 小兄弟F12常用来支持CHO、Hela和L－细胞生长以及原代大鼠肝细胞和前列腺上皮细胞的培养。MEM和F12 这两种培养基各取1/2，即可形成神经生物学最通用的培养基。

细胞培养的具体步骤和要求以及注意事项

提示：

细胞培养的具体步骤和要求以及注意事项

一、细胞复苏 将冻存细胞从液氮中取出后，在37℃水浴锅内不断摇动促进其融化。移人15ml离心管中，加入10ml预热的DMEM完全培养基，轻轻吹匀，离心，2000rpmX2min，弃上清液。 加入10ml DMEM培养基清洗，弃上清液。加入10ml DMEM完全培养基，轻轻吹打，接种于10cm盘中，在含5%CO2的细胞培养箱中培养。 二、细胞传代 细胞密度达到80%~90%时．去培养基，10ml PBS清洗2次。加入3ml含0．25%EDTA的胰蛋白酶，放人细胞培养箱3min。加人1ml DMEM完全培养基终止胰酶消化，转移至15ml离心管。 加入10ml PBS清洗细胞培养盘，转移至15ml离心管，2000rpmX2min，弃上清液。再加入10ml PBS（经高压灭菌，保存于40C），吹匀，吸取10微升进行计数，按照1×106/盘接种，在含5%CO2的细胞培养箱继续培养。 三、细胞冻存 细胞密度达到80%～90%时，去培养基，10ml PBS清洗2次。加入3ml含0.25%EDTA的胰蛋白酶，放人细胞培养箱3min。加入lmlDMEM完全培养基终止胰酶消化，转移至15ml离心管。加入10ml PBS清洗细胞培养盘，转移至15ml离心管，2000rpmX2min，弃上清液。 加入lml冻存液（90%血清，10%DMSO），放入冻存盒内（盒内有异丙醇，以保证温度降低的速度），立即放入一80℃冰箱内，过夜，第二天放入液氮中，可以保存至少两年，如不放人液氮，可以保存三个月。 冻存液的配制：70%的完全培养基+20%FBS+10%DMSO.DMSO要慢慢滴加，边滴边摇。 注意事项 （1）进入细胞间开始细胞培养时，必须严格按照下列步骤操作： ①确定所有的细胞操作用的溶液和耗材都已经消毒并检测没有问题，不确定的溶液和耗材请勿使用，除非特殊情况，不要借用别人的溶液。 ②确定衣服的袖口已经卷起或者白大褂的袖口已经扎紧。 ③确定酒精灯内的酒精量，需要的话及时进行补充。 ④确定所有需要用到的溶液和耗材都放在伸手可及的位置。为了方便单手开启瓶盖，实验开始前可以把所有瓶盖旋松。 ⑤尽量不要直接倾倒溶液，除非瓶口没有被烧坏。如果倾倒失败，溶液粘在瓶口，请用喷过75%酒精的纸巾仔细清洁瓶口周围（不要接触到瓶口）后在火焰上简单烧灼。 ⑥操作时如果不能肯定所用的耗材是洁净的，必须及时更换。 ⑦实验完毕及时收拾，保持工作区域清洁整齐，最后用75%酒精清洁台面。 （2）细胞污染的预防 ①实验用品防止污染。细胞培养所用试剂、耗材、器材的清洗、消毒要彻底，各种溶液灭菌要仔细，并在无菌实验检测阴性后才能使用。操作室及剩余的无菌器材要定期清洁、消毒、灭菌。 ②操作过程防止污染。 ③穿着容易起静电或吸附灰尘的衣物必须更换为白大褂后才能进入细胞间。 ④实验开始前需要确定戴的手套没有问题，只要接触过生物安全柜之外的物品，必须及时对手套进行消毒。 ⑤进入细胞培养间后关好门，坐下来尽量少走动以免影响生物安全柜的风帘。工作开始前要先用75%酒精棉球擦手和瓶盖。事先要严格检查所用的器材、溶液和细胞，不要把污染品或未经消毒的物品带入无菌室内，更不能随便使用，以免造成大规模污染。 ⑥细胞操作时动作要轻，必须在火焰周围无菌区内打开瓶口，并将瓶口放在火焰周围简单转动烧灼，注意不要让火焰把塑料瓶口烧化。 ⑦实验操作时生物安全柜的隔板要尽可能放低，尽量减少谈话，打喷嚏或咳嗽时绝对不能对着工作区，以免造成不必要的污染。 ⑧瓶盖应当倒放在远离自己的地方，以避免瓶盖被误操作所污染。 ⑨不要从敞开的容器口上方经过，以避免衣服上掉落不明物体对细胞的污染。 ⑩实验操作时要注意及时更换巴斯德吸管、移液枪枪头和移液管，切勿一根管子做到底。一旦发现接触了非洁净或者无法确定洁净的物品必须直接丢弃。实验完毕应及时收拾，保持实验室清洁整齐，最后用75%酒精清洁台面。 （3）防止细胞交叉污染 ①在进行多种细胞培养操作时，所用器具要严格区分，最好作上标记便于辨别。按顺序进行操作，一次只处理一种细胞，多种细胞多种操作一起进行时易发生t昆乱。 ②在进行换液或传代操作时，粘有细胞的移液枪头和移液管不要触及试剂瓶瓶口，以免把细胞带到培养基中污染其他细胞。 ③所有细胞一旦购置，或从别处引入，或自己建立，必须及时保种冻存，一旦发生污染可重新复苏细胞，继续培养。 扩展资料： 细胞培养（cell culture）是指在体外模拟体内环境（无菌、适宜温度、酸碱度和一定营养条件等），使之生存、生长、繁殖并维持主要结构和功能的一种方法。细胞培养也叫细胞克隆技术，在生物学中的正规名词为细胞培养技术。 不论对于整个生物工程技术，还是其中之一的生物克隆技术来说，细胞培养都是一个必不可少的过程，细胞培养本身就是细胞的大规模克隆。细胞培养技术可以由一个细胞经过大量培养成为简单的单细胞或极少分化的多细胞，这是克隆技术必不可少的环节，而且细胞培养本身就是细胞的克隆。 细胞培养技术是细胞生物学研究方法中重要和常用技术，通过细胞培养既可以获得大量细胞，又可以借此研究细胞的信号转导、细胞的合成代谢、细胞的生长增殖等。 参考资料：百度百科：细胞培养